ABSTRACT
introducción: la fisura labio palatina no sindrómica, NSCLP (del inglés Nonsyndromic cleft lip and palate) es una de las malformaciones congénitas más frecuentes tanto en Chile como en el resto del mundo. Presenta un modo de herencia multifactorial, en la que interactúan varios genes y el medio ambiente. Evidencias experimentales han demostrado la participación de Sonic hedgedhog (Shh) en la migración de las células de la cresta neural, en la transformación epitelio-mesénquima y en la formación de las estructurasmedias craneofaciales durante el desarrollo embrionario, es probable una asociación entre variantes de Shh y la NSCLP. Métodos: el objetivo de este trabajo fue evaluar las regiones exónicas e intrónicas adyacentes de Shh, en una muestra de 150 tríos caso-progenitores para hallar la asociación con NSCLP. Se utilizó el método PCR-RFLP para determinar la presencia de heterodúplex. Luego, se utilizó la técnica de Conformation Sensitive Gel Electrophoresis (CSGE) para ver la distorsión del ADN en los heterodúplex. Como método alternativo, se hizo un análisis de polimorfismos de un solo nucleótido (del inglés single-nucleotide polymorphism SNP) para determinar asociación entre NSCLP y Shh, para lo cual se utilizaron los SNP: rs1233555 y rs1233556, ubicados en el primer intrón de Shh. Resultados:no se observaron heterodúplex en ninguno de los segmentos de Shh analizados en 150 tríos, el análisis de SNP tampoco mostró asociación con Shh y FLPNS. conclusión: la no asociación puede deberse a que la frecuencia de distribución de los SNP en la población chilena es diferente a la de las poblaciones referidas, o a que el número de SNP analizados fue insuficiente, o la no inclusión para el análisis de otras regiones de Shh.
introduction: nonsyndromic cleft lip and palate (NSCLP) is one of the most common congenital malformations not only in Chile but also worldwide. It has a multifactorial inheritance pattern with interaction of several genes and the environment. Several experimental studies have proven the participation of Sonic hedgedhog (Shh) in the migration process of cells from the neural crest,in the epithelium-mesenchyme transformation, and in the formation of middle craniofacial structures during embryo development; an association between Shh variants and NSCLP is probable. Methods: the goal of this study was to evaluate both exonic and intronic regions adjacent to Shh, in a sample of 150 case-parent trios in order to find possible associations with NSCLP. The PCR-RFLP method was used to determine the presence of heteroduplex. Afterwards, the Conformation Sensitive Gel Electrophoresis (CSGE) technique wasused to visualize DNA distortion at the heteroduplexes. As an alternative method, a single-nucleotide polymorphism (SNP) analysis wasperformed in order to determine NSCLP-Shh associations, by means of these SNPs: rs1233555 and rs1233556, located at the first Shhintron. Results: no heteroduplexes were found in any of the analyzed Shh segments in 150 trios; SNP analysis did not show associations between Shh and NSCLP either. conclusions: this lack of association may be due to the fact that SNP distribution frequency among Chilean population is different to that of reference populations, or because the number of SNPs analyzed was not sufficient, or even because this study did not include other Shh regions.